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CRISPR-Cas9技术原理:

CRISPR(clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats)是一种来自细菌降解 入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中,CRISPR系统共分成3类,其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白(Cas蛋白)共同发挥作用,而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白?#32431;桑?#36825;为其能?#36824;?#27867;应用提供了便利条件。 

目前,来自Streptococcuspyogenes的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9蛋白(含有两个核酸酶结构域),可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物,然后通过PAM序列结合并侵入DNA,形成RNA-DNA复合结构,进而对目的DNA双链进行切割,使DNA双链断裂。 

由于PAM序列结构简单(5’-NGG-3’),几乎可以在所有的基因中?#19994;?#22823;量靶点,因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞,是目前最高效的基因组编辑系统。

CRISPR-Cas9技术优势:

1. 效率高:可精确编辑基因组,敲除效率高

2. 周期短:CRISPR-Cas9系统的构建和使用极为方便,极大降低了实验?#35759;齲?#32553;短实验周期

3. 高嵌合率,生殖遗传稳定;

4. 多重编辑能力:可实现多个?#24418;?#28857;同时进行基因打靶

5. 可实现大片段DNA敲除、入、条件性敲除。

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